Robust First Strand cDNA Synthesis Kit
——加強(qiáng)版高效cDNA一鏈合成試劑盒
產(chǎn)品概述
本產(chǎn)品基于PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase，包含合成高質(zhì)量第一鏈cDNA所需的所有成分，適合于后續(xù)的PCR、qPCR以及PCR克隆。5 × RT Reaction Mix包含優(yōu)化的緩沖體系和dNTPs；PreScript Ⅲ Enzyme Mix包含PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。同時(shí)可根據(jù)需要，選擇Oligo (dT)23VN、Random hexamers或基因特異引物作為逆轉(zhuǎn)錄引物。PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase是通過定點(diǎn)突變得到的RNase H活性缺失的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，該酶的熱穩(wěn)定性和cDNA合成效率得到大幅提升，適用于具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。
產(chǎn)品內(nèi)容
組分 | R413A | R413B |
5×RT Reaction Mix | 200 μL | 400 μL |
PreScript Ⅲ Enzyme Mix | 100 μL | 200 μL |
Oligo (dT )23VN(50μM) | 50 μL | 100 μL |
Random hexamers(50ng/μL) | 50 μL | 100 μL |
RNase-free ddH2O | 1 mL | 1 mL |
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
高度熱穩(wěn)定性和cDNA合成效率：PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase具有極高的熱穩(wěn)定性和cDNA合成效率，適用于具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄
模板兼容性強(qiáng)：兼容不同物種及完整度較差的Total RNA
應(yīng)用范圍廣：可用于使用Random Primer、Oligo dT Primer以及Specific Primer的各種逆轉(zhuǎn)錄情況
實(shí)驗(yàn)案例
1.不同長(zhǎng)度RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄能力
以1 μg HeLa細(xì)胞Total RNA為模板，Oligo(dT)
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VN為引物按照說明書體系和程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，取1 μL cDNA產(chǎn)物模板，用PfuMax HiFi DNA Polymerase進(jìn)行擴(kuò)增，可見R413產(chǎn)品可完整逆轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)達(dá)15kb的RNA模板。
2.與同類產(chǎn)品逆轉(zhuǎn)錄效率的比較
以1μg HeLa細(xì)胞RNA為模板，使用R413產(chǎn)品和市售其他公司同類產(chǎn)品，按照各自說明書推薦體系和程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。以逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA為模板，挑選高表達(dá)量和較低表達(dá)量?jī)煞N基因，進(jìn)行Realtime PCR檢測(cè)這兩種基因，結(jié)果顯示（左圖為高表達(dá)量基因檢測(cè)結(jié)果，右圖為較低表達(dá)量基因檢測(cè)結(jié)果），R413產(chǎn)品的逆轉(zhuǎn)錄效率優(yōu)于其他公司同類產(chǎn)品。
應(yīng)用范圍
高質(zhì)量第一鏈cDNA的合成，復(fù)雜RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄， PCR、qPCR以及PCR克隆；用于較長(zhǎng)的cDNA合成以及全長(zhǎng)cDNA 文庫(kù)的構(gòu)建等。
產(chǎn)品儲(chǔ)存
-20℃保存
