PreScript III RT ProMix for qPCR

Prescript Ⅲ RT ProMix For qPCR

——更高效的qRT-PCR專用預(yù)混液

產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品基于PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase，包含合成高質(zhì)量cDNA所需的所有成分，適合于兩步法RT-qPCR檢測。通過定點(diǎn)突變得到的PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase是RNase H活性缺失的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，酶的熱穩(wěn)定性和cDNA合成效率得到大幅提升。2× RT Reaction Mix包含優(yōu)化的緩沖體系、Oligo (dT)₂₃VN、Random hexamers和dNTPs，PreScript Ⅲ Enzyme Mix包含PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase和RNase Inhibitor。此外，產(chǎn)品針對qPCR進(jìn)行特別優(yōu)化，比例優(yōu)化的Random primers/Oligo (dT₎₂₃VN primer mix，可以在15min內(nèi)短時高效地合成qPCR所用的模板cDNA。

產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品優(yōu)勢

更高的熱穩(wěn)定性和cDNA合成效率：全新的逆轉(zhuǎn)錄酶PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase具有更好的熱穩(wěn)定性和更高的cDNA合成效率

優(yōu)異的逆轉(zhuǎn)錄性能：在50℃條件下也能夠?qū)?/span>具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的RNA模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

對模板兼容性強(qiáng)：兼容不同物種及完整度較差的Total RNA

能夠在15min內(nèi)短時高效的進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄：優(yōu)化比例的Random primers/Oligo (dT)₂₃VN primer mix，可以在15min內(nèi)短時高效地合成qPCR所用的模板cDNA

實(shí)驗(yàn)案例

1. 優(yōu)異的cDNA合成效率

在10μL反應(yīng)體系中分別添加HeLa細(xì)胞來源的Total RNA 0.5μg~0.5pg，分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。然后，在Realtime PCR反應(yīng)液(使用本公司S018產(chǎn)品)中分別添加上述的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液各1% (V/V)，用Realtime PCR對ACTB和B2M的cDNA量進(jìn)行定量，然后進(jìn)行cDNA合成量的比較。結(jié)果可見，在探討的范圍內(nèi)，模板RNA的量和cDNA的得率密切相關(guān)，但無論模板RNA量的多寡，仍可維持很高的cDNA合成效率?？梢娫谀康钠螡舛扔胁町惖臉悠分g，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)效率的變化并不大，因此可將定量結(jié)果的誤差控制在最小范圍內(nèi)。

2.與其他公司逆轉(zhuǎn)錄性能的比較

以梯度稀釋的HeLa細(xì)胞Total RNA為模板，在說明書提供的反應(yīng)體系及反應(yīng)條件下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后用Realtime PCR 進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，與A公司同類產(chǎn)品相比，PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase產(chǎn)品具有更高的逆轉(zhuǎn)錄性能。

2.對不同模板的逆轉(zhuǎn)錄能力

以HeLa細(xì)胞Total RNA為模板，挑選高、中、低三種表達(dá)量的基因，在說明書提供的反應(yīng)體系及反應(yīng)條件下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后用Realtime PCR檢測多對基因，結(jié)果表明，對不同表達(dá)量的基因，本產(chǎn)品都具有優(yōu)異的逆轉(zhuǎn)錄能力。

應(yīng)用范圍

合成用于qPCR的cDNA模板，高質(zhì)量 cDNA合成；全長cDNA文庫的構(gòu)建等。

產(chǎn)品儲存

-20℃保存