PreScript One-Step RT-PCR Kit
一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒
PreScript One-Step RT-PCR Kit采用了一步（One Step）RT-PCR 法。RNA→cDNA→PCR一管式反應(yīng)，中途不需開蓋添加任何試劑，降低污染風(fēng)險(xiǎn)。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)使用了英贊特別開發(fā)的新型反轉(zhuǎn)錄酶PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase。該反轉(zhuǎn)錄酶對(duì)具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的 RNA 模板也具有很強(qiáng)的延伸能力；PCR 反應(yīng)使用了擴(kuò)增性能優(yōu)越的Hot Start型DNA聚合酶C-SsoRobust Taq DNA Polymerase，大大提高了本試劑盒的擴(kuò)增性能和反應(yīng)特異性。
在本試劑盒中，已將PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase、C-SsoRobust Taq DNA Polymerase、RNase Inhibitor 以及 One Step RT-PCR 用穩(wěn)定劑等配制成了預(yù)混型的Prescript One-Step Enzyme Mix；同時(shí)把反應(yīng)用Buffer、dNTP以及Enhancer Solution配制成了預(yù)混型的2× One-Step RT-PCR Buffer的形式，簡(jiǎn)化了反應(yīng)液配制過程。反轉(zhuǎn)錄溫度可以設(shè)定為50℃，能夠有效抑制非特異性擴(kuò)增，可對(duì)RNA進(jìn)行高效的RT-PCR擴(kuò)增。
組分 | S035A | S035B |
Prescript One-Step Enzyme Mix | 100μL | 400μL |
2× One-Step RT-PCR Buffer | 625μL× 2 | 1.25 mL× 2 |
Control F-1 Primer(20μM) | 20μL | 80μL |
Control R-1 Primer(20μM) | 20μL | 80μL |
Positive Control RNA | 20μL | 80μL |
RNase Free ddH2O | 625μL× 2 | 1.25 mL× 2 |
擴(kuò)增能力強(qiáng)：該試劑盒擴(kuò)增長(zhǎng)至3kb基因片段，產(chǎn)物可用于TA克隆。
檢測(cè)靈敏度高:可檢測(cè)低至10pg的Total RNA，滿足RNA檢測(cè)的需求。
操作簡(jiǎn)便：一管式反應(yīng)，最大程度減少移液次數(shù)，避免操作失誤 及交叉污染。
擴(kuò)增能力及靈敏度
以Hela細(xì)胞來源的20ng Total RNA為模板，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為0.5kb~3.0kb的基因片段，結(jié)果表明，本產(chǎn)品可輕松擴(kuò)至3kb，且無明顯非特異產(chǎn)生。
將人293T細(xì)胞來源的100ng Total RNA進(jìn)行10倍梯度稀釋，共5個(gè)梯度（100ng~10pg），擴(kuò)增基因?yàn)?/span>GAPDH，片段長(zhǎng)度為0.8kb的基因片段，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PreScript One-Step RT-PCR Kit檢測(cè)限低至10pg。
一步法RT-PCR、、病毒RNA檢測(cè) 、TA克隆
-20℃保存
